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bmdm最新视觉报道_bmdm提取步骤(2024年11月全程跟踪)

内容来源：惠生活优选所属栏目：热点更新日期：2024-11-27

bmdm

𐟧젍1/M2巨噬细胞摄取检测法 𐟔젦ƒ𓨦检测M1和M2型巨噬细胞对特定化合物的摄取量吗？这里有两种刺激方法供你参考！ 𐟒ꠥ﹤𚎍1型巨噬细胞，首先取培养好的BMDM细胞，用PBS清洗后，加入含LPS（200 ng/ml）的培养基刺激6小时。之后加入待测化合物和阳性药，作用半小时后，通过一系列操作，最后用LC-MS进样检测。 𐟌𑠥﹤𚎍2型巨噬细胞，步骤类似。先取细胞，用PBS清洗，然后加入含IL-4和IL-13（20 ng/ml）的培养基刺激24小时。之后同样加入待测化合物和阳性药，作用半小时，最后进行检测。 𐟓Œ 注意：IL-4和IL-13的配制需要先用灭菌水溶解，再用海藻糖稀释至所需浓度。现在，你可以根据这些方法，轻松检测M1和M2型巨噬细胞对化合物的摄取情况了！𐟎‰

𐟔解决P65磷酸化无条带难题！ 𐟤”你是否在WB实验中遇到了P65磷酸化无条带的困扰？别担心，这里有一些实用的血泪经验分享给你！ 𐟔짻†胞模型选择很重要 RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞是常用的炎症细胞模型，与NF和炎症密切相关。此外，BMM/BMDM、THP-1等人单核细胞白血病细胞也是不错的选择。 𐟒‰合适的刺激物是关键 LPS（脂多糖）是激活NF信号通路的有效刺激物，其次是TNF€IL-1퉧‚Ž性因子。这些刺激物能诱导巨噬细胞分化，进而激活P65磷酸化。 𐟒ᥢž加M1阳性对照为了确保刺激方式合适，可以增加一个M1促炎巨噬细胞阳性对照。这样，当结果出现异常时，可以迅速排查问题所在。 𐟓LPS刺激条件参考实验室常用的LPS浓度和刺激时间多种多样，但可以通过查阅文献来找到适合自己实验条件的最佳参数。 𐟒᥮ž验细节不容忽视在制样过程中，务必添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，并全程低温操作以保持磷酸化的稳定性。此外，封闭液和一抗稀释液的选择也至关重要。希望这些经验能助你顺利解决P65磷酸化无条带的问题！𐟎‰

如何从小鼠中提取骨髓巨噬细胞BMDM 𐟐�𓨦„：8-14周大的小鼠都可以用来提取BMDM。一只小鼠的BMDM可以铺满一个10厘米的培养皿。如果你想要获得尽可能多的BMDM，可以考虑提取两只小鼠的前腿骨髓。 𐟔ꠦ�ꤥ悤𘋯𜚊小鼠处理：首先，用足量的75%乙醇对小鼠进行喷洒消毒，或者将其浸泡消毒。剪断腿部：用手术刀沿着小鼠大腿根部的髋关节处将整条腿拆下，注意不要切断腿骨。切断跟腱，切除胫骨周围的主要肌肉。用剪刀贴着股骨方向，切除股骨周围的主要肌肉。切除膝关节软组织，以获得股骨。切断腓骨及其周围肌肉，以暴露完整的胫骨。冲洗骨髓：将骨髓冲洗到细胞培养皿中，配好的DMEM（细胞培养处理，直径10厘米），每根骨头缓慢注射约2-3毫升DMEM，直至骨髓腔变白。确保DMEM不回流，以避免污染。培养基为DMEM+10%FBS+1%双抗+100 ng/mL M-CSF。 𐟧ꠦ取骨髓巨噬细胞BMDM需要一定的技巧和耐心，但通过以上步骤，你可以成功获得大量的BMDM细胞，用于科研实验。

巨噬细胞M1/M2极化实验详解巨噬细胞是一类重要的免疫细胞，主要存在于外周血和炎症组织中。它们属于单核细胞类群，通过吞噬细菌、死亡细胞或细胞残片参与非特异性免疫调节。巨噬细胞将信号传递给其他淋巴细胞及其他免疫细胞，参与特异性免疫调节。巨噬细胞通常以单核细胞前体的形式进入血液中，当单核细胞浸润到组织中时，会分化成巨噬细胞。巨噬细胞主要存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝脏以及脾脏等组织中。根据功能以及炎症分泌水平，巨噬细胞分为M1型和M2型两种亚群。 M1巨噬细胞主要由LPS（脂多糖）及IFN𜈥𙲦‰𐧴 𜉦🀦𔻯𜌥ˆ†泌IFN-𜈥𙲦‰𐧴 𜉣€TNF-𜈨‚🧘䥝死因子𜉧퉤🃧‚Ž症因子；M2巨噬细胞主要由IL4（白细胞介素4）、IL13（白细胞介素13）、M-CSF（巨噬细胞集落刺激因子）等激活，主要分泌IL10（白细胞介素10）等抗炎症因子。巨噬细胞的鉴定通常采用流式细胞术或免疫荧光实验，通过检测一些巨噬细胞标志物来进行。常见的人和小鼠M1巨噬细胞标志物有CD68、CD80、CD86、CD32等；常见人和小鼠M2巨噬细胞标志物有CD206、CD204、CD163等。这两种亚群的作用包括：①作为抗原提呈细胞；②杀伤肿瘤效应细胞；③通过释放溶解细胞酶直接杀伤肿瘤细胞；④处理和呈递肿瘤抗原，激活T细胞以产生特异性抗肿瘤细胞免疫应答；⑤通过特异性抗体介导ADCC效应杀伤肿瘤细胞；⑥分泌肿瘤坏死因子（TNF）等细胞毒性因子和产生超氧化代谢产物间接杀伤肿瘤细胞。在基础科学实验中，常用的巨噬细胞模型包括小鼠RAW264.7巨噬细胞、人THP1单核细胞、小鼠BMDM骨髓细胞等。动物实验研究巨噬细胞的造模更多是偏向于炎症模型，例如急性肺损伤模型。以下是几种常见的巨噬细胞诱导方法： THP-1（人单核细胞） THP-1是来自急性单核细胞白血病患者血液分离而来，在基础科研实验中，常常诱导分化为巨噬细胞来进行机制研究。THP-1通常受PMA（佛波酯）150nmol/L诱导24h即可分化为巨噬细胞，然后在PMA持续存在的情况下，LPS（100ng/ml）、IFN𜈲0ng/ml）诱导48h，产生M1巨噬细胞；IL4（20ng/ml）、IL13（20ng/ml）诱导48h，产生M2巨噬细胞。 RAW264.7细胞（小鼠单核巨噬细胞） RAW264.7细胞是主要炎症模型、巨噬细胞极化等体外研究细胞，广泛用于急性肺损伤、风湿性关节炎等模型中。LPS（200ng/ml），12h可以诱导此细胞向M1分化，产生炎症因子，10ng/ml IL-4诱导RAW264.7细胞12h可以产生M2细胞。通过这些方法，可以更好地研究巨噬细胞的极化过程和功能。

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