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FLUKA前沿信息_fluka培训(2024年12月实时热点)

内容来源：惠生活优选所属栏目：教程更新日期：2024-12-05

FLUKA

烟草叶片Co-IP实验，一文搞定！嘿，大家好！今天我要和大家分享一下如何在烟草叶片中进行瞬时表达和免疫共沉淀（Co-IP）实验的详细步骤。这个实验流程真的是相当复杂，但只要按照步骤来，其实也没那么难。准备好了吗？Let's go！材料和试剂 𐟛’ 首先，你需要准备一些材料和试剂。以下是你需要的东西：烟草种子：选那种生长在22℃下四周龄左右的烟草。农杆菌菌株：已经转入双元载体的农杆菌，比如pCAMBIA1300、pBIN19等，靶基因带有蛋白标签，这里以3㗆LAG标签为例。乙酰丁香酮（Sigma-Aldrich，目录号：D134406）：诱导剂。 MES（pH5.6）（Sigma-Aldrich，目录号：M8250）：调节pH值。蛋白酶抑制剂（Roche，目录号：04693132001）：防止蛋白降解。 NP-40（Fluka，目录号：74385）：用于提取蛋白。诱导培养基：具体配方见图二。侵染培养液：具体配方见图三。提取缓冲液：和诱导培养基、侵染培养液一样。 TBS：和提取缓冲液一样。 4㗓DS：和提取缓冲液一样。设备 𐟔犦Ž夸‹来是需要的设备： Anti-FLAG珠（Sigma-Aldrich，目录号：A2220）：用于免疫沉淀。 3㗆LAG多肽（Sigma-Aldrich，目录号：F3290）：用于检测FLAG标签的蛋白。蛋白G琼脂糖珠（GE，目录号：17-0618-01）：用于免疫沉淀。农杆菌培养用的试管、摇床等。离心机。 1mL注射器。实验步骤 𐟓 好了，材料和设备都准备好了，接下来就是实验步骤啦！准备工作：首先，选生长在22℃（16h光照/8h黑暗）四周龄左右的烟草。将带有3㗆LAG标签的农杆菌菌株在3mL含有相应抗生素的LB液体培养基中28℃、200rpm过夜培养。诱导培养基准备：将LB培养基中的农杆菌接种到诱导培养基中（过夜培养物按1/100稀释，或者培养8h的培养物按1/25稀释）。可以在早上准备好后当晚进行侵染，或者在晚上准备好后第二天早上做侵染。农杆菌培养：28℃、200rpm培养8-12小时，使农杆菌细胞处于对数生长期，OD=0.6-0.8。离心：将农杆菌培养物在50mL离心管中以3200㗧的速度离心10分钟。侵染培养液准备：准备好侵染培养液，在5-10mL的侵染培养液中重悬农杆菌沉淀。重悬农杆菌：使农杆菌重悬液的OD=0.1-0.3，每片叶子准备1mL重悬液即可。如果你想表达两种及以上蛋白，将每种农杆菌调好OD后混合即可。对于不同的质粒，推荐先进行预实验，通过调节OD值来控制蛋白的表达量，例如用更高OD的农杆菌来表达低丰度蛋白，用更低OD的农杆菌来表达高丰度的蛋白。小结 𐟓 好了，这就是整个实验的详细流程啦！希望对大家有所帮助。免疫共沉淀实验虽然复杂，但只要按照步骤来，其实也没那么难。祝大家实验顺利！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

四步搞定免疫荧光染色，简单又高效！想要做免疫荧光染色，但总觉得步骤太复杂？别担心，今天我来分享一个超级简单的四步免疫荧光染色法，让你轻松搞定！我们会在ibidi的Slide 8孔不可移除腔室载玻片中培养和染色贴壁细胞，以大鼠成纤维细胞为例，用多聚甲醛固定，再用线粒体染色MitoTracker对细胞核进行复染。当然，你也可以根据自己的需求使用其他固定技术和抗体染色。材料准备 Rat fibroblasts（细胞系） Slide 8 well, ibiTreat（ibidi, 80826） 2% Paraformaldehyde（PBS配制） 0.1% Triton⮠X-100（Fluka） 1% BSA in PBS（封闭液） 50 nM MitoTracker Green（Life Technologies） 0.1 /ml DAPI（Sigma）荧光显微镜（倒置），带有适当的滤光片组步骤一：培养细胞首先，在无菌条件下打开ibidi的Slide 8孔载玻片，放在Slide Rack或者适当的平面上。然后，准备细胞悬液（5 x 10 4细胞/ml），每个孔中加入300。盖上盖子后，把载玻片放入培养箱（37Ⰳ; 5% CO2），让细胞附着。培养至少3小时或者过夜。如果需要更长时间的细胞培养，建议几天后进行中等程度的交换。步骤二：固定、透化和封闭用细胞培养抽吸装置从孔中吸出细胞培养基。用Dulbecco PBS冲洗细胞，方法是将300缓慢加入每个孔。用约150 2% paraformaldehyde固定细胞20分钟。 20分钟后吸出液体，加入约150的0.1% Triton⮠X-100，10分钟后吸出液体，再用300 BSA封闭液洗涤细胞。步骤三：染色准备染色和抗体溶液。用150 DAPI溶液在室温下培养30分钟。用300 BSA封闭溶液洗涤细胞两次。用150 MitoTracker溶液培养45分钟。用300 BSA封闭溶液洗涤细胞两次。吸出溶液，逐滴添加约150的ibidi封片剂。步骤四：成像最后，在荧光显微镜下用合适的滤光片组观察细胞，你还可以选择用ibidi浸油来观察细胞。就这么简单！四步搞定免疫荧光染色，赶紧试试吧！𐟒ꀀ

浅谈重离子加速器演示设施被动束传输系统中次级中子特性的蒙特卡罗研究来聊聊那“高大上”的重离子加速器，特别是它那个“炫”到不行的演示设施里，那个被动束传输系统里次级中子的“私房事儿”。咱们得用接地气儿的大白话，把这高深莫测的研究给捋顺了。想当初，老祖宗就说了：“学无止境，教海无涯。”（《咱自个儿编的，意思差不多就行》）这不，人类跟自然界较劲儿的脚步那是一刻不停歇。在物理界这片星辰大海里，重离子加速器简直就是颗璀璨的“科技宝石”，啥癌症治疗、材料捣鼓、核子奥秘、天体大探索，都离不开它。这家伙能“嗖嗖”地往目标上发射高能离子束，跟放烟花似的，还带出了一堆“小弟”——中子、质子还有其他离子小弟。这些小弟们，个个身怀绝技，科研上能顶半边天，实际用起来也是杠杠的。所以，咱们今天就来聊聊，怎么用蒙特卡罗这位“算命大师”（其实是模拟算法高手），去摸透这些次级中子小弟在被动束传输系统里的“小九九”。毕竟，了解他们，才能更好地利用他们嘛！这重离子加速器啊，简直是个医疗界的“大炮筒”，尤其是打癌症这块儿，威力杠杠的。医生们用这玩意儿，就像是用精准制导导弹去轰肿瘤，癌细胞一打一个准儿。不过呢，这“导弹”一飞出去，还会炸出些小碎片，就是那次级中子，它们可不管三七二十一，到处乱窜，还会给周围的好细胞带来伤害，连材料都躲不过它的“毒手”。所以啊，咱们得好好研究研究这些小碎片，摸透它们的脾气。这就好比做饭前得先把刀磨快，不然切菜都费劲。只有搞清楚了次级中子的特性，咱们才能设计出更聪明的光束传输系统，让那“导弹”更精准，减少误伤。这时候，蒙特卡罗模拟这位“计算界的大侦探”就闪亮登场了。它擅长用随机数玩“角色扮演”，模拟各种复杂系统的行为，就像是通过无数次的“彩排”，来预测真正的演出效果。在辐射物理学的舞台上，它更是大展身手，专门研究电离辐射和物质的“爱恨情仇”。特别是在重离子加速器的世界里，蒙特卡罗模拟就像是个超级显微镜，帮咱们看清离子束和目标材料之间的“亲密接触”，还有那些次级粒子是怎么蹦跶出来的，接下来又打算怎么捣蛋。这样一来，咱们就能更有把握地对付它们了。这次咱们搞了个大动作，用FLUKA这“蒙特卡罗界的网红代码”来整了个活——模拟重离子加速器里的“光束快递”系统。FLUKA这家伙，那可是圈里的老炮儿，啥场面没见过，用过都说好！咱们模拟的是个400 MeV/u的碳离子束，就像快递小哥的包裹，嗖的一下就飞进了水目标里。这“光束快递”系统，说白了就是一堆混凝土、钢、铅的大杂烩，它们的主要任务就是吃掉光束，别让它乱跑伤害到无辜群众。其中，准直器就是快递小哥的导航仪，确保包裹准确无误地送到目标手里。模拟结果一出，嘿，发现了个小秘密：材料不同，中子产出也天差地别。混凝土和钢简直就是中子生产的“小能手”，而铅呢，则是中子终结者，最能压制它们。这给我们设计“光束快递”系统提供了新的灵感：在关键路段多加点铅，让中子们无处遁形，减少辐射威胁。更有趣的是，中子的诞生还和它们出生的角度有关。那些和光束轴玩“大角度恋爱”的中子，不仅能量爆表，还能跑得更远，对加速器周边的朋友来说，这可不是啥好消息。所以，咱们在设计系统时，得把角度问题也纳入考虑范围，多设几道防线，保护大家的安全。干活儿的时候，咱们可以挑点“中子害羞”的材料，再给它们配上“中子吸尘器”，这样一来，中子就乖乖听话，辐射也就能少闹腾点。这法子不光能让加速器设计更合理，还能给咱们干活的人多加一层“安全罩”。就像给关键地方装上“中子拦路虎”，中子就不敢乱窜了，辐射自然也就老实了。说来说去，咱们这次研究啊，就像是给重离子加速器演示设施的“中子派对”来了个“蒙面舞会”模拟，发现混凝土和钢是“中子制造机”，而铅呢，简直就是“中子终结者”。还有啊，中子这家伙还特别爱凑热闹，要是它们跟光束轴的角度大，那能量就高，跑得还远，辐射也就跟着嚣张。所以啊，咱们还是得用那“中子害羞”的材料和“中子吸尘器”，把它们给治得服服帖帖的。嘿，各位小伙伴，听我说啊，这些发现简直就是加速器设计师们的福音，不仅能让束流传输系统更“溜”，还能给整个加速器穿上“防弹衣”，让它安全指数爆表。咱们得用对料，设计好防护罩，这样一来，辐射那些“捣蛋鬼”就休想轻易溜进来，工作人员的健康也就有了“保镖”。这就跟古时候的智慧一样，“小洞不补，大洞吃苦”，咱们得“未雨绸缪”，别等事儿大了才后悔。

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