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flowjo权威发布_flowjo官网(2024年12月精准访谈)

内容来源:惠生活优选所属栏目:观点更新日期:2024-12-03

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流式细胞术检测细胞周期全攻略 细胞周期是指从细胞分裂产生的新细胞生长开始,到下一次细胞分裂形成子细胞结束的过程。这个过程主要分为Go、G1、S、G2和M期,其中M期又分为前期、中期、后期及末期。Go期是细胞休眠期,暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,去执行一定的生物学功能。 𐟌€ 流式检测细胞周期的基本原理 流式检测细胞周期的常用方法是检测DNA的含量。通过选择能与DNA结合的荧光染料,根据细胞各个时期DNA含量不同从而荧光强度不同的方法,检测出细胞周期。常用的染料有PI、7AAD、DAPI、Hoechst33258和DRAQ7等。 𐟔砦“作步骤 离心收集细胞,预冷PBS洗细胞2次。 将细胞悬液滴入预冷的70%乙醇中,于4℃固定过夜,或-20℃长期固定。 离心收集细胞,PBS洗细胞1次。 加入500ul稀释后PI染液(含1mg/mlPI,2mg/mlRNaseA),室温避光孵育30min。 流式细胞仪检测:细胞计数2-3万个。 使用Flowjo分析结果。 𐟚蠦𓨦„事项 进样速度需要控制在低速以下,否则结果中可能没有S期存在。 PI染料具有细胞毒性,需在1小时内上机检测。 PI染料与DNA结合松散,洗涤可能会造成染料丢失。除非染色结果异常,无需洗涤。 使用预冷乙醇固定时,向内加入细胞时,如果产生大量絮状物,说明细胞状态差,胞内DNA释放缠绕细胞,造成团块,需重新制备样品。 PI可与RNA结合,因此在染色时需加入RNA酶去除胞内RNA。 𐟓Š 数据分析 Flowjo分析结果时,需要注意CV值(变异系数),一般CV值越小,峰型越好,越尖锐。G2/G1的比值一般为1.8-2.0之间,若小于1.8,则细胞染色不充分。 通过以上步骤和注意事项,可以准确地进行流式检测细胞周期的实验,并得到可靠的结果。

科研神器大放送!安装包直发,效率翻倍! 𐟚€ 科研神器大集合!包括ImageJ(Fiji)、Photoshop、FlowJo V10、EndNote X9、Snapgene、Graphpad、SPSS和Origin等软件安装包,全部直发,无需繁琐的网盘下载! 𐟓栥ㅥŒ…闪电发货,告别传统下载方式,让你的科研效率飞速提升!无论是数据处理还是文献管理,这些工具都能帮你轻松搞定。 𐟌Ÿ 学术生活从此变得流畅无比,科研效率翻倍提升!快来体验这份科研小确幸吧~

流式数据处理指南:从零开始到熟练 嘿,大家好!今天我想和大家分享一下我初次接触流式数据处理时的经历。说实话,刚开始的时候真的是一头雾水,不知道从哪儿下手。希望我的经验能帮到那些和我一样迷茫的小伙伴们。 第一步:了解基本概念 𐟓š 首先,你得搞清楚几个基本概念。流式数据处理主要是用来分析大量数据流的,比如生物实验中的细胞数据。你需要了解一些基本的参数,比如FSC-A、SSC-A、FL1-H等等。这些参数代表了不同的细胞特性,比如大小、形状和荧光强度。 第二步:打开FlowJo 𐟖寸 接下来,打开FlowJo软件。这个软件真的很强大,但也很复杂。一开始你可能只会看到一堆乱七八糟的图表和参数。别担心,这都是正常的。 第三步:导入数据 𐟓‚ 把你实验得到的数据导入到FlowJo中。这一步很重要,因为你要分析的就是这些数据。导入后,你会看到各种不同的数据集和子集。 第四步:设置门限 𐟚ꊦŽ夸‹来就是设置门限了。这个步骤非常关键,因为它决定了你的分析结果是否准确。你需要根据实验目的和已知的生物学知识来设定合适的门限。 第五步:分析数据 𐟓ˆ 设置好门限后,就可以开始分析数据了。FlowJo提供了很多强大的工具来帮助你分析数据,比如统计不同细胞群体的数量和比例。 第六步:导出结果 𐟓‘ 最后一步就是把分析结果导出到Excel或者其他格式的文件中,方便后续处理和展示。 小结 𐟎‰ 总的来说,流式数据处理是一个非常复杂但非常有趣的过程。虽然一开始可能会觉得很迷茫,但只要一步步来,多实践几次,你一定会越来越熟练的。希望我的分享能帮到你们!如果有任何问题,欢迎留言讨论哦!

FlowJo制复合图秘籍 想要在FlowJo中制作复合Histogram图?以下是详细步骤: 1️⃣ 首先,对流式文件进行分析,画出单独的Histogram图,并确定门的位置。 2️⃣ 接着,点击Edit➡Copy to Layout Editor,将需要复合的图表导入编辑器。 3️⃣ 按照顺序将需要叠加的图表拖动到同一位置,进行叠加。 4️⃣ 右键点击,选择最下方的Histogram➡Offset,调整图表位置。 5️⃣ 再次右键点击,选择Properties,进入设置界面。 6️⃣ 在弹出的对话框中选择Specify➡Y axis,选择你需要的模式: 𐟌Ÿ Auto模式:根据细胞绝对值count作图。如果细胞数差异很大,不建议使用此模式。 𐟌Ÿ Manual模式:手动选择展示的细胞数。同样,如果细胞数差异很大,不建议使用此模式。 𐟌Ÿ Modal模式:按照细胞所占上级比例作图。推荐用于同一管细胞中的不同细胞群体的同一标记。 𐟌Ÿ Unit Area模式:与Modal类似,但图中占比不同,可根据实际情况选择。 7️⃣ 在Legend下面有修改注释表包含内容的选项,可根据需要进行调整。 8️⃣ 最后,导出图片。 按照以上步骤,你就可以轻松制作出复合Histogram图啦!𐟎‰

FlowJo插件大揭秘!𐟔 你还在只用散点图分析流式数据吗?FlowJo有超多强大的插件等你来探索!快来试试这些超实用的工具吧~ DownSample 这个插件可以帮助你降低数据的维度,让你更轻松地处理大量数据。 UMAP 使用UMAP技术进行无监督学习,发现数据中的隐藏模式。 FlowSOM 通过自组织映射(SOM)技术,对数据进行降维和聚类。 Dead TCells & BClls 这两个插件专门用于分析特定类型的细胞,帮助你更精准地研究。 ClusterExplorer 使用自我组织映射(Self-Organizing Maps)进行聚类,直观展示结果。 Phenograph 通过Phenograph算法,发现数据中的潜在簇。 FindAnomalies 这个插件可以帮助你找出数据中的异常值,进行异常检测。 ViolinBox 使用ViolinBox插件,进行密度估计和可视化。 FlowClean 自动化清洗FlowJo数据,去除杂质,提高分析质量。 StainIndex & FlowMeans 这两个插件分别用于计算染色指数和流式细胞仪数据的平均值。 CytoNorm 使用CytoNorm插件,标准化处理流式细胞仪数据。 EmbedSOM & Dead TCells & BClls 这些插件将FlowSOM映射到二维空间,进行无监督聚类。 TriMap & HyperFinder & CBA 这些插件分别用于三维映射、超参数寻找和细胞分析。 快来试试这些FlowJo插件,让你的流式数据分析更加深入和全面吧!𐟚€

𐟓Š流式数据处理全解析𐟔 𐟒᤽ 是否对流式数据处理感到困惑?别担心,我们来帮你!𐟚€ 𐟔즬owjo分析出图,让你轻松解读流式数据。我们提供专业的flowjo教学指导,𐟓š精通多色流式技术,无论是凋亡、周期还是免疫学背景,我们都能帮你搞定!𐟒ꊊ𐟌᯸从Scatter到Viability,再到Leukocyte Gating,我们一步步指导你如何操作。想要更深入地了解免疫细胞panel?没问题,我们推荐合适的panel,让你轻松获取想要的实验结果。𐟎𐟔无论你是新手还是老手,只要你有流式数据处理的需求,我们都在这里为你提供帮助。快来加入我们,一起探索流式数据的奥秘吧!𐟌Ÿ

美国博士生的一天:充实又有趣 今天真是充满活力的一天!早上7:30就起床了,八点出门和朋友一起去遛狗。上午8到9点之间,我们在外面散步,享受阳光和新鲜空气。 9:30一到实验室,我就直奔FlowJo,开始处理数据。从9:30到12:00,我一直在做幻灯片,准备下次的学术报告。中午12:00到12:30,我稍微放松了一下,摸了一会儿鱼。 12:30到1:30,我和实验室的小伙伴聊了聊天,交流了一下最近的实验进展和生活中的琐碎事情。1:30到2:30,我们开了一个小组会,讨论了一下实验的下一步计划。 2:30到5:00,我出去修车,顺便带狗子去了兽医那里,还跑了一些杂事。5:30到6:50,我们去狗公园玩了一会儿,狗狗们跑得可开心了。 晚上6:50到11:30,我和朋友一起去吃饭、逛超市,还计划去芝加哥玩几天。今天真是充实又有趣的一天! 总结一下今天的安排:和朋友一起遛狗、和小伙伴聊天、参加小组会、修车、带狗看兽医、外出吃饭和购物。科研时间大约3.5小时,社交时间8小时(和朋友1小时,和同事1小时),遛狗两次共计2小时。吃饭两顿,午饭自带,晚饭在外面解决。自我满意程度:⭐️⭐️⭐️⭐️⭐️ 今天真的很棒!和朋友一起遛狗、出去吃好吃的,准备迎接小长假。科研生活充满了挑战和乐趣,实验的下一步计划也很清晰。如果能有点独处时间锻炼一下就更好了。总体来说,今天的感觉非常棒!

Annexin V-PI染色,测凋亡! 细胞凋亡是生物学中一个复杂但至关重要的过程,它涉及多种分子和染色方法。其中,Annexin V-PI染色是一种相对简单的双染方法,用于检测细胞凋亡。让我们深入了解一下这种方法的工作原理和操作步骤。 𐟔 细胞凋亡的标志 细胞凋亡过程中,细胞核会变形、浓缩、碎裂,这可以通过Hoechst染色或DAPi染色来观察。此外,细胞膜也会发生变化,部分膜会包裹细胞内容物形成凋亡小体,这可以通过电子显微镜观察到。还有一种变化是细胞膜破损外翻,这可以用标记细胞膜内侧的染料来检测,配合检测细胞核内物质的染料进行双染,判断细胞凋亡的进程。 𐟒᠁nnexin V-PI染色的原理 Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白,能够特异性结合凋亡细胞膜外层的磷脂酰丝氨酸。正常细胞的磷脂酰丝氨酸位于细胞膜磷脂双分子层的内层,而凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸则位于外层。因此,Annexin V可以通过钙依赖的方式结合凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸。 𐟧ꠦ“作流程 制备细胞悬液:用不含EDTA的胰酶消化细胞,制备细胞悬液,2000rpm离心5分钟,弃上清。 洗细胞:用PBS洗一次,再用1x binding buffer洗一次。 调整细胞浓度:使用1x binding buffer将细胞浓度调整为1-5x10^6/ml。 Annexin V染色:取100ul细胞悬液,加入5ul荧光标记的Annexin V,室温避光孵育10-15分钟。 洗细胞:用1x binding buffer洗一次,200rpm离心5分钟,200ul 1x binding buffer重悬细胞。 PI染色:加入5ul PI,混匀。 流式测定:使用专用软件分析流式数据,得到凋亡细胞比例。 𐟓Š 数据处理与绘图 定量分析:使用专用软件分析流式数据(可以使用flowJo),得到凋亡细胞比例。将3次独立重复的数据都分析完后进行统计分析并绘制柱状图。 读图指南:在Annexin V-PI染色中,PI+细胞碎片代表晚期凋亡细胞,Annexin V+ PI-代表早期凋亡细胞,Annexin V+ PI+代表正常细胞。 𐟔젥𞋥ˆ†析 例如,Jurkat细胞在经过抗Fas抗体处理后,可以通过Annexin V-PI染色来检测细胞的凋亡情况。通过对比不同处理条件下的细胞染色结果,可以定量分析细胞的凋亡比例。 𐟓Œ 小贴士 在进行Annexin V-PI染色时,建议多加一组未染色的组,以便于寻找目标细胞群。 在实验设计时,可以考虑添加阴性对照和空白对照,以增加实验的可信度。 通过这些步骤和技巧,你可以精确地检测到细胞的凋亡情况,为生物学研究和药物开发提供有力支持。

FlowJo细胞周期分析全攻略𐟓Š 𐟓‚ 拖拽样本文件:将样本数据拖拽到FlowJo工作区。 𐟔 双击样本:双击一个样本,圈出主群。 𐟔— 去黏连:有两种选择,可以选择FSC-A和FSC-H进行去黏连,或者使用PI-A和PI-H数据。 𐟓ˆ 调整为直方图:选择PI-A作为X轴,调整坐标。 𐟔 选择细胞群:选择单个细胞群数据,选择细胞周期分析的小程序,并更换拟合模型。 𐟓Œ 模板应用:将分析好的细胞周期模板拖到所有样本。 𐟑€ 查看结果:逐个查看每个样本的细胞周期。 𐟓Š 细胞周期分析步骤: 拖拽样本文件到FlowJo工作区。 双击样本,圈出主群。 选择FSC-A和FSC-H进行去黏连,或者使用PI-A和PI-H数据。 调整为直方图,选择PI-A作为X轴,调整坐标。 选择单个细胞群数据,选择细胞周期分析的小程序,并更换拟合模型。 将分析好的细胞周期模板拖到所有样本。 逐个查看每个样本的细胞周期。

𐟒ᦵ式补偿调节全攻略𐟒ኦ𕁥𜏨ᥥ🧚„调节,是不是让你感到头疼呢?𐟤”别担心,跟着我的步骤,轻松搞定! 𐟔首先,实验前记得查找光谱查看器,像BD、Thermo、BioLegend这些大品牌都有哦!查看荧光之间是否存在溢出,哪些荧光溢出最严重,心里有数。 𐟔Œ补偿和电压息息相关,所以上机时电压一定要调好,这是关键一步! 𐟒𛦎夸‹来,脱机调补偿的时候到了!你可以利用FlowJo或者DeNovo Fcs Express等三方软件来帮忙。这些软件能提供强大的数据分析功能,让你的补偿调节更加精准。 𐟤“还有疑问吗?或者想了解更多流式相关的内容?别担心,留言告诉我,我会一一回复!同时,我也会准备视频教程,展示如何在CytoFlex仪器软件及三方流式数据分析软件上调补偿的步骤。 𐟚€流式补偿调节,其实并不难!只要掌握了方法,轻松搞定!加油哦!𐟒ꀀ

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