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bl文库最新视觉报道_bl文库网(2024年12月全程跟踪)

内容来源：惠生活优选所属栏目：热点更新日期：2024-12-03

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CRISPR-sgRNA文库构建全攻略𐟔슰ŸŒˆ 实验目的掌握CRISPR-sgRNA文库构建的原理和操作步骤。构建针对特定基因的sgRNA文库，用于基因编辑研究。 𐟧ꠥꌦ料试剂𐟧ꊧ𛆨Œ感受态细胞（如DH5a） pUC57载体模板DNA 引物 dNTPs Taq酶 T4DNA连接酶限制性内切酶（如BsmBl或BbsI）琼脂糖磷酸缓冲液 70%乙醇无菌水仪器𐟔슐CR仪器琼脂糖凝胶成像系统微量移液器离心机恒温培养箱净化工作台 𐟓 实验步骤设计sgRNA序列𐟓 依据目标基因设计特异性sgRNA序列，避免脱靶。合成sgRNA模板𐟖‹️ 配制PCR反应体系：模板DNA：10 ng 引物：10 pmol/L dNTPs：0.2 mM Taq酶：1U 磷酸缓冲液：5 无菌水补足至50 进行PCR反应： 95℃预变性5 min 95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，共30个循环 72℃延伸10 min 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物𐟔슥‡†备1.5%琼脂糖凝胶。与DNA marker一起电泳。观察确认产物大小正确。切割载体✂️ 用限制性内切酶切割pUC57载体。琼脂糖凝胶电泳检测切割效果。连接sgRNA模板与载体𐟔— 将PCR产物与切割后的载体进行T4 DNA连接。 16℃过夜连接。转化感受态细胞𐟦 连接产物与感受态细胞混合，冰浴30 min。 42℃热激90 s。冰浴2 min。加入适量LB培养基，37℃培养1 h。筛选阳性克隆𐟔 挑取单个菌落进行PCR验证。确认阳性克隆后提取质粒。测序验证𐟔⊦取的质粒测序验证sgRNA序列是否正确。 ⚠️ 实验注意事项保持无菌环境防止污染。 PCR防止引物二聚体产生。内切酶切割载体确保完全切割。转化感受态细胞注意热激时间控制。

书库来喽，限时一天!!! 上次没赶上的宝子抓紧哦打开链接后，直接点一下左上角，打开搜索框搜你需要的文，搜出来后直接点那个文档，下载一下就可以了抱走一定一定要吱声哦，你们互动决定了我开文库的频率[doge][good] 「推文」「bl推文」

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